Ar.A4克隆感受態細胞

產品規格CAT#: BFNC86119-01(10×100ul)/BFNC86119-02(50×100ul)/BFNC862119-03(100×100ul)
Ar.A4：                                                                      100μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl )                            10μl
保存條件(保質期)：                                         -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)

產品說明

發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染 大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4發根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時具有卡那霉素抗性。

青旗生物生產的Ar.A4感受態細胞經特殊工藝制作，pK7WGF2質粒（壯觀霉素抗性）檢測，轉化效率>104 cfu/μg DNA。

常規操作方法

1.取-80℃保存的Ar A4發根農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。

2.每100μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，*使用前盡量做預實驗確定所加質粒的量），用手快速、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY 液體培養基，于 28℃振蕩培養 2小時。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上，倒置放于 28℃培養箱培養 2-3 天

● 農桿菌相關抗生素配方：

常用農桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養基，則加入15g 瓊脂粉。

注意事項

1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。

2. 混勻質粒時應用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻，務必使質粒快速、均勻分散開，與感受態細胞充分接觸。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或降低涂板的菌量。

4. Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性質粒的轉化。