JM108化學感受態(tài)細胞

產品規(guī)格CAT#: BFNC86054-01(20×100ul)/BFNC86054-02(100×100ul)

JM108：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月）

基因型

F- endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+)

產品說明

JM108來源于JM106菌株，初是作為黏粒文庫的宿主被改造而成。 JM108菌株缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。JM108菌株大的特點是擴繁質粒產量大，純度高，且質量穩(wěn)定，特別是超螺旋質粒比例較高，超螺旋質粒所占比例一般>90%(gyrA96突變型說明JM108菌株的DNA-gyrase 基因被突變，導致拓撲異構酶Ⅱ的功能受影響，增加了超螺旋質粒的比例)，非常適合后續(xù)的動物細胞轉染實驗（超螺旋質粒可提高細胞轉染的效率）。此外該菌株具有萘啶酸抗性。

青旗生物開發(fā)的JM108感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×10⁹ cfu/μg DNA。

JM108化學感受態(tài)細胞

操作方法

1. JM108感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱至少13小時。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。