上海elisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在植物學檢驗的各領域中。
上海elisa試劑盒的技術關鍵:
1、細胞上清:前處理有必要把細胞離心去掉,每孔直接加100μl即可。假定濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋;
2、腦脊液:前處理有必要把細胞離心去掉,每孔直接加100μl即可。假定濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋;
3、血清血漿:請參與50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量參與,缺少部分用標準品稀釋液賠償至100ul;
4、組織勻漿液的樣本,要制備過程中需要在緩沖液中參與蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內源性蛋白酶降解,構成查看效果的值偏低。
上海elisa試劑盒的實驗操作步驟:
1、把試劑混勻,切記實驗時不要加理大量含有泡沫的液體,避免實驗產生誤差。
2、跟數據測樣決定板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔 加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7、每孔加入底物各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。一定要避免光照。
8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9、在450nm波長處測定各孔的OD值。